Генно-инженерный синтез мутантного дифтерийного токсина CRM197: влияние и оптимизация условий гетерологичной экспрессии гена в клетках E. coli

CRM197 (Cross Reacting Material 197) представляет собой неактивную форму экзотоксина Corynebacterium diphtheriae, используемого в качестве белка-носителя для производства конъюгированных полисахаридных вакцин и иммунотерапевтических препаратов. Развитие данных направлений требует разработки эффективной и рентабельной технологии получения CRM197 требуемого качества. Разработан высокоэффективный метод получения рекомбинантного CRM197 в виде гибрида с белком-партнером SUMO в клетках E. coli, позволяющий синтезировать более 3 г/л в виде телец включения. Было показано существенное влияние типа экспрессионного вектора, условий гетерологичной экспрессии гена и культивирования продуцента на его растворимость. В результате снижения температуры культивирования и использования промотора гена, кодирующего белок теплового шока СspA, а количество растворимого SUMO-CRM197 составило более ٪ от общего белка при уровне биосинтеза около 2 г/л. Коэкспрессия целевого гена с геном дисульфид-изомеразы DsbC E. coli, позволила получить целевой белок полностью в растворимом состоянии и выходом более .4 г/л. Полученные результаты могут стать основой для разработки перспективной отечественной технологии получения CRM197.