Lipoprotein (a) levels in children with heterozygous familial hypercholesterolemia

Full Text

Обоснование

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) — основная причина смерти и инвалидизации населения по всему миру. В России их вклад в общую смертность населения по состоянию на 2022 г. составляет около 49% [1]. Показатель смертности вследствие нарушений функций сердечно-сосудистой системы неуклонно растёт даже на фоне масштабных профилактических мероприятий. Среди причин летальных исходов от ССЗ лидирующие позиции в нашей стране занимают ишемическая болезнь сердца (ИБС) и цереброваскулярная болезнь [1], которые зачастую являются исходами атеросклероза.

Известно, что уровень липидов определяется генетическими и средовыми факторами [2, 3]. Самое распространённое генетически обусловленное нарушение липидного обмена — семейная гиперхолестеринемия (СГХС). СГХС — это моногенное аутосомно-доминантное заболевание, сопровождающееся повышенными концентрациями холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП) в плазме крови, ранним развитием атеросклеротического поражения магистральных сосудов и возникновением ССЗ в молодом возрасте [4].

В развитии атеросклероза участвует множество факторов, среди которых значимая роль уделяется нарушениям липидного обмена. В последние годы исследователи активно изучают липопротеин (а) — Лп(а). Лп(а) является коронарогенным фактором риска и способствует атерогенезу путём прямого осаждения на артериальной стенке, а также увеличению продукции провоспалительных цитокинов [5].

Однако недостаточно изучено, каким образом меняется концентрация атерогенных липопротеинов при СГХС в детском возрасте. Существуют единичные исследования, посвящённые Лп(а) у детей с СГХС, а полученные результаты не конкретизированы в зависимости от возраста [6, 7].

Цель

Определить содержание Лп(а) в сыворотке крови у детей с гетерозиготной СГХС в различных возрастных группах.

Материалы и методы

Дизайн исследования

Проведено сравнительное проспективное продольное когортное исследование, в котором приняли участие 243 ребёнка в возрасте от 5 до 17 лет.

Критерии соответствия

Критерии включения пациентов в основную группу:

• возраст пациента от 5 до 17 лет 11 месяцев и 29 дней включительно;
• установленный диагноз «гетерозиготная форма семейной гиперхолестеринемии» в соответствии с Российскими клиническими рекомендациями, основанными на критериях Simon Broome Registry [8];
• информированное согласие на участие в проводимом исследовании детей и/или их родителей.

Критерии невключения пациентов основной группы:

• возраст пациента менее 5 и более 17 лет 11 месяцев и 29 дней;
• основные заболевания/состояния, а также лекарственные препараты, которые могут обусловливать вторичное повышение ХС ЛПНП (холестаз, нефротический синдром, хроническая болезнь почек, сахарный диабет, гипотиреоз, ожирение, синдром Кушинга; лекарственные средства — циклоспорин, диуретики, глюкокортикоиды, амиодарон, иммунодепрессанты, комбинированные оральные контрацептивы, антивирусная терапия при вирусе иммунодефицита человека).

Условия проведения и продолжительность исследования

Исследование проводилось на базе республиканского Центра детской липидологии в период с 2017 по 2022 г.

Описание медицинского вмешательства

Объём обследования детей включал сбор анамнестических данных, акушерского анамнеза, анализа антенатального и перинатального периодов, наследственной отягощённости по ССЗ, которые получены в личной беседе с родителями во время обследования, данные о перенесённых заболеваниях, сведения о вредных привычках, занятиях физической культурой и спортом, дополнительных учебных нагрузках; сведения о диете; объективный осмотр — жалобы, антропометрия: измерение массы тела и роста, оценка физического развития проводилась в соответствии со стандартами Всемирной организации здравоохранения об исследовании физического развития детей (WHO Growth Reference) при помощи программ для персональных компьютеров WHO Anthro и WHO AnthroPlus. Проводился осмотр специалистами (офтальмолог, нефролог, невропатолог, эндокринолог, гастроэнтеролог).

Основной исход исследования

Определение содержания Лп(а) в сыворотке крови у детей основной (n=122) и контрольной (n=121) групп.

Анализ в группах

Участники исследования были разделены на 2 группы: дети с диагнозом «семейная гиперхолестеринемия, гетерозиготная форма» (n=122) и их здоровые сверстники (n=121). Дети исследуемых групп были сопоставимы по возрасту, полу, росту и массе тела.

Методы регистрации исходов

Забор крови проводили натощак, после 12-часового голодания. Уровни общего холестерина (ОХ), триглицеридов (ТГ), холестерина липопротеинов высокой плотности (ХС ЛПВП), ХС ЛПНП определяли в сыворотке крови с помощью набора реактивов F. Hoffman La Roche (Швейцария) на автоматическом анализаторе Сobas 6000 (Roche, Швейцария). Количественное определение Лп(а) проводилось иммунотурбидиметрическим методом на автоматическом анализаторе Beckman Coulter AU5800 c использованием набора реактивов Lp(a) Ultra (Beckman Coulter, США). После калибровки оценивали полученную кривую на анализаторе Beckman Coulter. Сразу же после калибровки в соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики проводили контроль качества. При смешивании пробы с буфером R1 и раствором антисыворотки R2 Лп(а) специфически связываются с антителами к человеческому Лп(а), в результате чего образуются нерастворимые агрегаты. Интенсивность поглощения агрегатов пропорциональна концентрации Лп(а) в пробе. Единица измерения Лп(а) — мг/дл.

Этическая экспертиза

Проведение исследования одобрено на заседании Локального этического комитета Казанского государственного медицинского университета от 25 января 2022 г. (выписка из протокола заседания № 1).

Статистический анализ

Накопление, корректировку, систематизацию исходной информации проводили с помощью электронных таблиц Microsoft Office Excel 2016. Для статистического анализа и визуализации полученных результатов использовали среду для статистических вычислений R 4.1.3 (R Foundation for Statistical Computing, Вена, Австрия). Количественные показатели оценивали на предмет соответствия нормальному распределению с помощью критерия Шапиро– Уилка (при числе исследуемых менее 50) или критерия Колмогорова–Смирнова (при числе исследуемых более 50). Количественные показатели, имеющие нормальное распределение, описывали с помощью средних арифметических величин (M) и стандартных отклонений (SD), границ 95% доверительного интервала (ДИ). В случае отсутствия нормального распределения количественные данные описывали с помощью медианы (Me) и нижнего и верхнего квартилей (Q1–Q3). Сравнение двух групп по количественному показателю, имеющему нормальное распределение, при условии равенства дисперсий выполнялось с помощью t-критерия Стьюдента, при неравных дисперсиях — с помощью t-критерия Уэлча. Сравнение двух групп по количественному показателю, распределение которого отличалось от нормального, выполнялось с помощью U-критерия Манна–Уитни. Различия показателей считались статистически значимыми при p <0,05.

Результаты

Участники исследования

В исследовании участвовали 243 ребёнка в возрасте от 5 до 17 лет (Ме 11 [7, 0–15, 0]), из них 122 ребёнка с диагнозом «семейная гиперхолестеринемия, гетерозиготная форма», вошедшие в основную группу. Контрольную группу составил 121 здоровый ребёнок. Дети контрольной и основной групп были подразделены на 3 возрастные подгруппы: 5–7, 8–12, 13–17 лет.

Основные результаты исследования

Анализ семейного анамнеза детей с СГХС выявил 100% отягощённость по ССЗ у мужчин до 55 лет, у женщин до 60 лет. Среди родственников первой линии родства отягощённая наследственность по отцовской линии составила 84,1%, по материнской линии — 9,1%. ИБС диагностирована у 84% (102) родителей, атеросклероз брахиоцефальных артерий имели 89% (109), острое нарушение мозгового кровообращения по атеротромботическому типу 6,6% (8). Следует отметить, что острый коронарный синдром (ОКС) перенесли 39% (47) родителей, при этом медиана возраста первого эпизода ОКС составила 39,0 [37, 0; 44, 5] лет. Реваскуляризация миокарда в виде аортокоронарного шунтирования проведена 17% (21) родителей. Наличие у себя ксантоматоза кожи отметили 9,8% (12), в то время как у родителей контрольной группы аналогичных событий в анамнезе не было.

Анализ физического развития включённых в исследование детей в разрезе возрастных подгрупп 5–7, 8–12, 13–17 лет не выявил статистически значимых различий по возрасту, полу, росту и массе тела среди участников основной и контрольной групп, что свидетельствует об отсутствии отличий физического развития детей с СГХС от общей популяции.

Анализ липидограммы обследованных детей показал увеличение ОХ, ХС ЛПНП в группе СГХС, что характерно для данного заболевания (табл. 1). Наряду с этим выявлено повышение ХС ЛПВП (р <0,0001), ТГ (р <0,05) у детей основной группы в сравнении со здоровыми сверстниками, при этом данное увеличение не является патологическим и укладывается в референсные интервалы для детского возраста.

 

Таблица 1. Липидный профиль обследуемых детей, Ме (Q1–Q3)

Table 1. Lipid profile of the examined children, Me (Q1–Q3)

Показатель	Контрольная группа	СГХС	р
ОХ, ммоль/л	3,60 (3,30–4,10)	7,30 (6,96–7,74)	<0,0001
ХС ЛПВП, ммоль/л	1,20 (1,10–1,27)	1,30 (1,10–1,40)	<0,0001
ХС ЛПНП, ммоль/л	2,20 (1,90–2,43)	5,20 (4,90–5,77)	<0,0001
ТГ, ммоль/л	1,00 (0,78–1,20)	1,10 (0,90–1,30)	0,0175
Индекс атерогенности	1,89 (1,54–2,22)	4,55 (3,84–5,31)	<0,0001

Примечание. ОХ — общий холестерин, ХС ЛПВП — холестерин липопротеинов высокой плотности,  ХС ЛПНП — холестерин липопротеинов низкой плотности, ТГ — триглицериды.

Note. ОХ — total cholesterol, ХС ЛПВП — high-density lipoprotein cholesterol, ХС ЛПНП — low-density lipoprotein cholesterol, ТГ — triglycerides.

 

Анализ возрастных особенностей липидного профиля выявил увеличение уровней ОХ и ХС ЛПНП у пациентов с СГХС во всех возрастных подгруппах в сравнении с участниками контрольной группы аналогичного возраста. Показатель ХС ЛПВП был значимо повышен при СГХС по сравнению с контрольной группой в группе 5–7 лет (1,27±0,21 и 1,16±0,23 ммоль/л соответственно, р=0,0328) и 8–12 лет (1,34±0,21 и 1,16±0,17 ммоль/л соответственно, р <0,0001). При оценке ТГ выявлено повышение значений у детей СГХС в группе 13–17 лет относительно участников контрольной группы: 0,89 (0,68–1,12) ммоль/л против 1,10 (1,00–1,30) ммоль/л, р=0,0002.

В настоящем исследовании отмечено статистически значимое повышение Лп(а) у пациентов с СГХС: 14,8 (6,3–24,3) мг/дл по сравнению с детьми контрольной группы — 10,8 (5,5–14,8) мг/дл, p=0,0002 (рис. 1).

 

Рис. 1. Концентрация липопротеина (а) у обследуемых детей. СГХС — семейная гиперхолестеринемия, Лп (а) — липопротенин (а).

Fig. 1. Concentration of lipoprotein (a) in the examined children. СГХС — familial hypercholesterolemia, Lp (a) — lipoprotenin (a).

 

При сравнении концентрации Лп(а) между основной и контрольной группами в зависимости от возраста значимые различия выявлены только в возрастной группе 8–12 лет и сопровождались увеличением Лп(а) в группе СГХС: 14,9 (5,5–25,4) мг/дл относительно здоровых сверстников — 8,6 (4,9–12,3) мг/дл, р=0,0012 (табл. 2).

 

Таблица 2. Концентрация липопротеина (а) у обследуемых детей в зависимости от возраста (мг/дл), Ме (Q1–Q3)

Table 2. Concentration of lipoprotein (a) in examined children depending on age (mg/dl), Me (Q1–Q3)

Когорта	Контрольная группа (n=121)	СГХС (n=122)	р1
Когорта в целом	10,8 (5,5–14,8)	14,8 (6,3–24,3)	0,0002*
5–7 лет	13,4 (6,7–15,5)	16,6 (8,0–24,2)	0,0755
8–12 лет	8,6 (4,9–12,3)	14,9 (5,5–25,4)	0,0012*
13–17 лет	10,8 (5,8–14,3)	13,4 (6,6–22,2)	0,1791
р2	p1–2=0,0111 p2–3 >0,05 p1–3 >0,05	p1–2 >0,05 p2–3 >0,05 p1–3 >0,05	–

Примечание. СГХС — семейная гиперхолестеринемия. p₁ — уровень значимости, полученный с использованием теста Манна–Уитни, р₂ — уровень значимости, полученный с использованием теста Данна с поправкой Холма для множественных сравнений.

Note. СГХС — familial hypercholesterolemia. p₁ — p-value obtained using the Mann-Whitney test, p₂ — p-values obtained using the Dunn test with Holm correction for multiple comparisons.

 

Анализ содержания Лп(а) среди пациентов с СГХС в зависимости от возраста не выявил статистически значимых отличий между собой в группах 5–7, 8–12 и 13–17 лет: 16,6 (8,0–24,2) мг/дл, 14,9 (5,5–25,4) мг/дл и 13,4 (6,6–22,2) мг/дл соответственно, р >0,05). В контрольной группе статистически значимое снижение Лп(а) отмечено только в группе 8–12 лет: 13,4 (6,7–15,5) мг/дл относительно детей 5–7 лет — 8,6 (4,9–12,3) мг/дл, р=0,0111.

Индивидуальный анализ содержания Лп(а) в сыворотке крови детей основной и контрольной групп показал, что в группе здоровых участников не было ни одного ребёнка со значением Лп(а) >30 мг/дл. Среди пациентов с СГХС у 14,7% детей (18) наблюдается повышение Лп(а) >30 мг/дл, при этом у 4 из них показатель был >50 мг/дл.

 

Рис. 2. Частота выявления уровня Лп(а) >30 мг/дл у детей с СГХС в зависимости от отягощённости по инфаркту миокарда до 40 лет среди родителей пробандов.

Fig. 2. Frequency of detection of Lp(a) level >30 mg/dl in children with FH depending on the burden of myocardial infarction before age 40 among proband parents.

 

Учитывая, что уровень Лп(а) является генетически обу-словленным и полностью экспрессируется к первому году жизни человека, а также представленную в литературе связь высокого уровня Лп(а) с риском ранних сердечно-сосудистых событий среди членов семьи [7], мы провели подробный анализ отягощённой наследственности по сердечно-сосудистой патологии у родителей пробандов в зависимости от концентрации Лп(а) их детей. Особый акцент уделяли ОКС, а также возрасту его дебюта. Из 122 родителей у 23 (18,9%) был зарегистрирован ОКС в возрасте до 40 лет. Уровень Лп(а) >30 мг/дл среди детей этих родителей был выявлен у 7 детей (из 23), что составило 30,4% (рис. 2). При этом среди родителей, не имеющих в анамнезе ОКС до 40 лет, количество детей с повышенным уровнем Лп(а) составило 11 (из 99) — 11,1%. Статистический анализ показал, что шансы выявления уровня Лп(а) >30 мг/дл у детей с СГХС при наличии отягощённого семейного анамнеза раннего ОКС среди родителей были выше в среднем в 3,5 раза (95% ДИ: 1,14, 10,33; p=0,0239).

Обсуждение

Резюме основного результата исследования

В исследовании выявлена повышенная частота высокого уровня Лп(а) у пациентов с СГХС по сравнению со здоровыми детьми. Полученные результаты согласуются с рядом исследований, в которых также продемонстрировано увеличение уровня Лп(а) при СГХС в детском возрасте по сравнению с контролем [9]. Выявлено, что дети с СГХС и уровнем Лп(а) >30 мг/дл с большей вероятностью имеют членов семьи с дебютом ОКС в возрасте до 40 лет.

Обсуждение основного результата исследования

В последние годы в центре внимания исследователей наряду с исследованием ХС ЛПНП находятся вопросы, связанные с изучением Лп(а) и его влиянием на развитие атеросклеротического поражения сосудов.

Интерес учёных привлекает строение Лп(а). Лп(а) представляет собой частицу, состоящую из аполипопротеина B100, окружённого холестерином, фосфолипидами, ТГ и ковалентно связанного с аполипопротеином А (АпоА) с помощью дисульфидного мостика [10]. Около 88% от общей массы Лп(а) занимают АпоВ и АпоА (42% и 46% соответственно). Последние исследования, посвящённые протеомному анализу Лп(а), показали его сложный состав [11]. Более 35 белков, включающие ApoA1, apoC3, apoC1, apoF, связаны с поверхностью Лп(а).

Уровень Лп(а) является наследственным и в значительной степени определяется наличием однонуклеотидных полиморфизмов в гене АпоА на хромосоме 6q22-23 [7]. Уникальной особенностью этой частицы является то, что она уже полностью экспрессируется к первому году жизни человека, в отличие от других показателей липидного профиля, значения которых стабилизируются намного позже [12].

Установлено, что Лп(а) способствует атерогенезу путём прямого осаждения на артериальной стенке, увеличению продукции провоспалительных цитокинов из-за содержания в нём окисленного фосфолипида и, предположительно, представляющего собой тот самый мостик в цепочке доказательств, связывающих тромбоз и атеросклероз [5, 10, 12].

Целым рядом авторов показано, что Лп(а) является независимым фактором риска ИБС, атеросклероза, аортального стеноза, тромбоза и инсульта [10, 13]. При этом увеличение уровня Лп(а) коррелирует с ранним дебютом указанных заболеваний. B. Nordestgaard и соавт., 2010 г., приводят информацию, что около 20% людей во всем мире имеют повышение Лп(а) [14], а его повышение, в свою очередь, в 2–4 раза увеличивает риск ранней ИБС [15]. Заслуживают внимание исследования, демонстрирующие, что уровень Лп(а) достоверно выше у пациентов с СГХС по сравнению со здоровыми лицами [16].

Несмотря на большое количество работ, изучающих структуру, функции и метаболизм Лп(a) и его влияние на развитие атеросклеротических ССЗ, вопросы о том, кому из пациентов необходимо проводить анализ, как интерпретировать результаты и необходима ли коррекция повышенного уровня, до сих пор активно обсуждаются.

Как показал анализ литературных источников, исследования уровня Лп(а) у детей немногочисленны, а проблемы его измерения остаются не до конца решёнными. Среди педиатрической популяции проведены исследования, посвящённые изучению влияния высокой концентрации Лп(а) на состояние сосудов. Показано, что у детей высокий уровень Лп(а) >30 мг/дл коррелирует с отягощённым анамнезом по развитию ранних ССЗ в семье [17]. Интересный дизайн представлен в исследовании J. Lapinliemu и соавт., 2015 г., в котором продемонстрировано нарушение эндотелиальной функции у детей в случае увеличения уровня Лп(а) у их родителей [18].

Наибольшее количество работ проведено по изучению Лп(а) у детей с инсультом [19]. Показано, что Лп(а) может быть одной из причин гиперкоагуляционных нарушений при данном состоянии. Полученные результаты стали основанием включения Лп(а) в скрининг липидов у молодых людей, перенёсших ишемический или геморрагический инсульт.

Особый интерес представляет анализ Лп(а) у детей с СГХС. Ряд исследований показали, что у детей с СГХС уровень Лп(а) выше по сравнению с контролем [9]. В свою очередь, другие авторы не зарегистрировали достоверной разницы уровня Лп(а) между здоровыми детьми и детьми с СГХС [20]. I. Narverud и соавт., 2014 г., утверждают, что уровень Лп(а) и СГХС не зависят друг от друга, в то же время уточняют, что пациенты с СГХС, имеющие высокий уровень Лп(а), подвержены большему риску преждевременного атеросклероза.

Ограничения исследования

Основным ограничением исследования является небольшая выборка, в связи с тем, что СГХС остаётся малодиагностируемым заболеванием. На сегодняшний день в 90% стран мира распространённость СГХС неизвестна.

Заключение

Несмотря на важность оценки ХС ЛПНП как одного из основных предикторов ССЗ при СГХС, показано, что оценка уровня Лп(а) имеет не меньшее значение, чем исследование традиционного липидного профиля среди пациентов с СГХС в детском возрасте. В отличие от большинства липопротеинов, уровень Лп(а) полностью стабилизируется к первому-второму году и обусловлен генетической экспрессией. Высокая наследуемость Лп(а) подчёркивает необходимость его измерения у пациентов с СГХС и представляет собой возможность для осуществления реверсивного каскадного скрининга с выявлением взрослых членов семьи с СГХС, имеющих ещё больший риск ранних сердечно-сосудистых катастроф. Использование ХС ЛПНП в качестве основного лабораторного прогностического маркёра сердечно-сосудистого риска у детей с СГХС может не выявить когорту пациентов с риском формирования ранних ССЗ, что обусловливает необходимость оценки Лп(а) у пациентов с СГХС начиная с детского возраста.

Дополнительная информация

Источник финансирования. Научное исследование выполнено за счет средств Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (Приоритет-2030).

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Вклад авторов. Л.Ф. Галимова — ведение пациентов, обзор литературы, сбор и анализ литературных источников, написание текста и редактирование статьи; Д.И. Садыкова — концепция и дизайн исследования, обзор литературы; Е.С. Сластникова — ведение пациентов, сбор и анализ литературных источников; Ч.Д. Халиуллина — статистическая обработка данных; К.Р. Салахова — обзор литературы, сбор и анализ литературных источников, написание текста и редактирование статьи. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).

Информированное согласие на участие в исследовании. Все участники исследования до включения в исследование добровольно подписали форму информированного согласия, утверждённую в составе протокола исследования этическим комитетом.

Additional information

Funding source. This work was supported by the Kazan Federal University Strategic Academic Leadership Program (Priority-2030).

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

Authors’ contribution. L.F. Galimova — patient supervision, literature review, collection and analysis of literary sources, writing the text and editing the article; D.I. Sadykova — study concept and design, literature review; E.S. Slastnikova — patient supervision, collection and analysis of literary sources; Ch.D. Khaliullina — statistical data processing; K.R. Salakhova — literature review, collection and analysis of literary sources, writing the text and editing the article. All authors confirm that their authorship complies with the international ICMJE criteria (all authors made a significant contribution to the development of the concept, conduct of the study and preparation of the article, read and approved the final version before publication).

Consent for publication. Written consent was obtained from all the study participants before the study screening in according to the study protocol approved by the local ethic committee.

About the authors

Liliya F. Galimova

Children’s Republican Clinical Hospital; Kazan State Medical University

Email: lilu1@inbox.ru
ORCID iD: 0000-0001-5576-5279
SPIN-code: 8427-6727

MD, Dr. Sci. (Medicine)

Russian Federation, 420138 Kazan; 49 Butlerov street, 420012 Kazan

Dinara I. Sadykova

Kazan State Medical University; Kazan Federal University

Email: sadykovadi@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-6662-3548
SPIN-code: 2455-6428

MD, Dr. Sci. (Med.), Professor, Research Laboratory ”Genetics and Clinic of Human Lipid Metabolism”

Russian Federation, 49 Butlerov street, 420012 Kazan; 420008 Kazan

Evgeniia S. Slastnikova

Children’s Republican Clinical Hospital; Kazan State Medical University; Kazan Federal University

Email: e.slastnikova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1732-7443
SPIN-code: 9025-7570

MD, Cand. Sci. (Medicine) , Research Laboratory ”Genetics and Clinic of Human Lipid Metabolism”

Russian Federation, 420138 Kazan; 49 Butlerov street, 420012 Kazan; 420008 Kazan

Chulpan D. Khaliullina

Kazan State Medical University

Email: chulpandanilevna@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-6667-7725
SPIN-code: 9224-5882

postgraduate student

Russian Federation, 49 Butlerov street, 420012 Kazan

Karina R. Salakhova

Kazan State Medical University; Kazan Federal University

Author for correspondence.
Email: karina.salakh@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7327-7025
SPIN-code: 5764-8282

postgraduate student, Research Laboratory ”Genetics and Clinic of Human Lipid Metabolism”

Russian Federation, 49 Butlerov street, 420012 Kazan; 420008 Kazan

References

Supplementary files